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実演生物学:Ch2. -６A,：パラフィン切片HE染色標本（ニジマス稚魚）の作製法
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1. 全体の工程日程（概要：６日間）
2. 2nd Stage（脱水/パラフィン浸透）の時間割
3. 4th Stage（染色/封入工程）の時間割
4. 模式図とボタン番号の関係
1st Stage 【固定/脱灰】：４日間
前処理→前固定→整形→固定脱灰→(保存)
（すぐ脱水パラフィン浸透処理を行わないときには、
70％EtOHで保存）
2nd Stage 【脱水/パラフィン浸透】：２日間
脱水→中間剤→パラフィン浸透→包埋
→
整形/台木付け→ブロック完成
（包埋後、パラフィンブッロクとして保存）
3rd Stage 【ミクロトーム操作、薄切・伸展/選取/接着】：１日間
薄切→伸展→スライドグラスへ貼り付け/乾燥
（乾燥後、未染色プレパラートとして保存）
4th Stage 【染色/封入】：１日間
脱パラフィン→親水化→H/E染色→脱水
→透徹→封入→乾燥 (染色標本は永久標本)
（完成した染色標本は永久標本である。）
処理・操作 処理時間
脱水処理 (Dehydration)
□０）70%EtOH（又は流水） 数時間（ブアン除去、なくても良い）
□１）70%EtOH １時間（又はそれ以上でも良い）
□２）80%EtOH １時間（又はそれ以上）
□３）90%EtOH １時間（又はそれ以上）
□４）95%EtOH １時間（又はそれ以上）
□５）99.5%EtOH １時間（又はそれ以上）
□６）Abs.EtOH 1 １時間
□７）Abs.EtOH 2 １時間
中間剤処理 （脱水試料にパラフィンを浸透させるために）
□８）キシレン 1 1時間
□９）キシレン 2 2時間
（必要に応じて長くする、一晩放置してもOK）
パラフィン浸透処理 (Infiltration)
パラフィン槽の温度は
第１槽を約58℃、第2槽を約72℃、第3槽を約77℃に設定
（全部を75℃位にしてもOK）。
□10）パラフィン 1 1時間
□11）パラフィン 2 1時間
□12）パラフィン 3 1-2時間
□12+α）減圧処理
（可能なら行う：吸引減圧処理20分でパラフィン浸透）
休まず、包埋（パラフィンブロックの作成）を行う。
包埋（Embedding：パラフィンブロックの調製）
処理・操作 処理時間
脱パラフィン（deparafinization)
□ 1：Xylene 1st 10分
□ 2：Xylene 2nd 10分
□ 3：Abs.EtOH（キシレン除去） ５分
親水処理（Hydration)
□ 4：95% EtOH 2〜３分,またはそれ以上でも良い
□ 5：80% EtOH 2〜３分,またはそれ以上でも良い
□ 6：70% EtOH 2〜３分,またはそれ以上でも良い
□ 7：50% EtOH 2〜３分,またはそれ以上でも良い
□ 8：Water（DW） 2〜３分,またはそれ以上でも良い
染色 (H/E)
□ 9：Mayer's Hematoxylin 15分
（試し染色で処理時間を決めておく）
□ 10：水洗（流水、水道水） 10〜20分
（青みがかるまで流水で脱色、標本に直接流水をかけない）
□ 11：Eosin （ｘ４希釈液の場合） 30秒〜1分程度
（試し染色で処理時間を決めておく）
□ 12：Water（DW/水道水） few dips（数回上下させる）
（染色判定法：軟骨が青く筋肉が赤く染まるようにする）
脱水（Dehydration）と透徹
□ 13：70％ EtOH １ dip（または数回上下させる）
□ 14：80％ EtOH １ dip（または数回上下させる）
□ 15：90％ EtOH １ dip（または数回上下させる）
□ 16：95％ EtOH few dips
□ 17：99.5％ EtOH（くみ出し*） few dips
□ 18：Abs. EtOH 1st ３分,またはそれ以上も可
□ 19：Abs. EtOH 2nd ３分,またはそれ以上も可
□ 20：Xylene 1st (中間剤) ３分,またはそれ以上も可
□ 21：Xylene 2nd(透徹/保存) ３分,またはそれ以上も可
□移動用に用いるキシレンツボに入れ封入操作を待つ（乾燥厳禁）
＜目次と移動ボタンの対応＞
＜パラフィン切片HE染色標本の作製法＞
A. 組織標本作製技法の概要と安全対策
B. 一覧表：組織標本作製工程
C. 主な試薬と備品、その調製法
D. 実技手順1（固定)：前処理・固定/脱灰・整形（1st Stage）
E. 実技手順2（包埋)：脱水・パラフィン浸透・包埋（2nd Stage）
F. 実技手順3（薄切)：ミクロトーム操作、薄切・伸展/接着（3rd ）
G. 実技手順4（染色)：染色、脱水、封入（4th Stage）
H. 代用キシレン法
I. 主な関連解説と参考書一覧
・・・このシートは終わり・・・・
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